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共同見證友芝友生物的發展
友芝友生物新建報告基因法用于CD38×CD3雙特異性抗體活性評估及質控
  • 2021-10-23 08:00:00
  • 2967

近日,武漢友芝友生物制藥有限公司(以下簡稱“友芝友生物”)分析與質控團隊完成了報告基因法檢測CD38×CD3雙特異抗體生物學活性的研究,其研究論文 “Development of a Reporter Gene Method to Measure the Bioactivity of Anti-CD38×CD3 Bispecific Antibody” 發表于Antibody Therapeutics期刊上。

 

友(you)芝友(you)生物自主(zhu)研發(fa)的(de)抗(kang)CD38×CD3雙(shuang)抗(kang)體(ti)(Y150)是(shi)基于YBODY®平臺(tai)技(ji)術(shu)開發(fa)的(de)非對稱性(xing)雙(shuang)特異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)。體(ti)內外(wai)研究表明,Y150能(neng)激活(huo)T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao),并有效殺(sha)(sha)傷表達CD38的(de)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。在雙(shuang)抗(kang)的(de)開發(fa)過程中(zhong),建立一種能(neng)反映雙(shuang)抗(kang)體(ti)作(zuo)用機制(zhi)(MOA)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)生物學活(huo)性(xing)評價方法非常(chang)重要。基于細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)毒性(xing)的(de)檢測(ce)方法如CCK-8,MTS,MTT,LDH等,可以(yi)(yi)以(yi)(yi)外(wai)周血單核細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(PBMC)或T細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)和細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)因子誘導的(de)殺(sha)(sha)傷細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(CIK)為(wei)效應細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao),直接檢測(ce)對腫(zhong)瘤(liu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)殺(sha)(sha)傷作(zuo)用,但由于這(zhe)些效應細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)難(nan)以(yi)(yi)獲取,且存(cun)在較大的(de)個體(ti)差(cha)異(yi),因此不(bu)適合作(zuo)為(wei)雙(shuang)抗(kang)生物學活(huo)性(xing)的(de)評價方法。

 

近年來(lai),基于細胞(bao)(bao)水平(ping)的(de)報告基因法廣(guang)泛應用于檢測單克(ke)隆抗(kang)體(ti)和雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)的(de)生物(wu)(wu)學(xue)(xue)活性(xing)。檢測以CD3為靶點(dian)的(de)雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)時(shi),雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)一端(duan)(duan)與腫(zhong)瘤細胞(bao)(bao)相關(guan)的(de)靶點(dian)結(jie)合,另(ling)一端(duan)(duan)與工程改造的(de)Jurkat T細胞(bao)(bao)上的(de)CD3結(jie)合,激活T細胞(bao)(bao)反應元件(NFAT-RE)介(jie)導表(biao)達的(de)螢光素酶(mei),與外加的(de)螢光素酶(mei)底物(wu)(wu)反應,其化學(xue)(xue)發光強度可定量檢測雙(shuang)(shuang)(shuang)抗(kang)的(de)生物(wu)(wu)學(xue)(xue)活性(xing)(圖1)。

 

 

圖1 報告基因法檢測(ce)CD3靶點雙抗生物學活性

 

當(dang)采用(yong)報告基因(yin)法(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)Y150的(de)生(sheng)物(wu)學活性(xing)(xing)時(shi),由于Jurkat T細胞(bao)(bao)上(shang)同時(shi)表達CD38和CD3,在沒有(you)腫瘤細胞(bao)(bao)存在的(de)條件下(xia),兩個Jurkat T細胞(bao)(bao)會通過雙抗(kang)的(de)連接(jie)而自我(wo)激(ji)活,產生(sheng)非(fei)特異性(xing)(xing)信號(hao),從而干擾實驗(圖(tu)2,綠色(se))。利(li)用(yong)CRISPR-Cas9技術敲除(chu)Jurkat T細胞(bao)(bao)上(shang)CD38的(de)表達,并構(gou)建穩定(ding)的(de)單克隆細胞(bao)(bao)株進行Y150生(sheng)物(wu)學活性(xing)(xing)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(圖(tu)2,藍(lan)色(se)),成功消除(chu)了(le)非(fei)特異性(xing)(xing)信號(hao)(圖(tu)2,棕(zong)色(se))。該(gai)方(fang)法(fa)操作簡便,檢(jian)(jian)測(ce)(ce)時(shi)間(jian)周期較短,分析方(fang)法(fa)驗證(zheng)結果表明該(gai)方(fang)法(fa)在50%-200%范圍內(nei)具有(you)良好的(de)準確度、精(jing)密度、線性(xing)(xing),以及穩健性(xing)(xing)(表1),可用(yong)于抗(kang)CD38×CD3雙抗(kang)體的(de)QC放行檢(jian)(jian)測(ce)(ce)和穩定(ding)性(xing)(xing)研究。

 

 

 

圖2 Y150報告基(ji)因(yin)法檢測Y150生(sheng)物學活(huo)性方法建(jian)立

 

 

表1 報告(gao)基因法檢(jian)測(ce)Y150生物學活性方法學驗(yan)證(zheng)結果

 

在Y150的(de)(de)(de)高溫穩定性(xing)研究(jiu)中(zhong),報告基(ji)因(yin)法、細胞殺傷法和ELISA法測(ce)(ce)定的(de)(de)(de)結(jie)果與(yu)CEX-HPLC法測(ce)(ce)定的(de)(de)(de)電荷(he)異質體(ti)之間存在高度相關性(xing),生物學(xue)(xue)活(huo)性(xing)或相對結(jie)合活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)降(jiang)低與(yu)酸性(xing)電荷(he)異質體(ti)的(de)(de)(de)增加呈(cheng)線性(xing)相關,且這三種活(huo)性(xing)檢(jian)測(ce)(ce)法測(ce)(ce)定的(de)(de)(de)相對效價變化趨勢一致(圖(tu)3),進一步說明(ming)本研究(jiu)建立的(de)(de)(de)報告基(ji)因(yin)檢(jian)測(ce)(ce)可以反映(ying)Y150的(de)(de)(de)作用機制,能(neng)反應T-細胞招募類雙抗(kang)體(ti)雙靶點的(de)(de)(de)協同效應,用于其生物學(xue)(xue)活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)評(ping)估及質量控制。

 

 

圖3 三種活性檢測方法相關性研究結果

 

關于友芝友生物制藥

 

YZYBIO

 

武漢友(you)(you)芝友(you)(you)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)制(zhi)藥(yao)有限公司是(shi)(shi)一(yi)(yi)家專(zhuan)(zhuan)門從(cong)事(shi)以(yi)免疫和(he)(he)靶向療(liao)法為(wei)核心(xin)(xin)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)制(zhi)藥(yao)公司,專(zhuan)(zhuan)注于(yu)雙(shuang)特異性抗(kang)體(ti)(ti)藥(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)研發(fa)與產(chan)業化。雙(shuang)特異性抗(kang)體(ti)(ti)藥(yao)物(wu)(wu)是(shi)(shi)下一(yi)(yi)代(dai)抗(kang)體(ti)(ti)藥(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)核心(xin)(xin)研方向,在腫瘤、免疫、炎癥、心(xin)(xin)血管和(he)(he)感染等重(zhong)大疾(ji)病領域(yu)具(ju)有廣泛(fan)的(de)(de)(de)(de)治(zhi)療(liao)前景。友(you)(you)芝友(you)(you)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)制(zhi)藥(yao)基(ji)于(yu)自主(zhu)創(chuang)(chuang)(chuang)新的(de)(de)(de)(de)雙(shuang)抗(kang)(YBODY®, CHECKBODY™ 等)、納米抗(kang)體(ti)(ti)、4價多抗(kang)、Fc優化等平臺技術(shu),已(yi)(yi)成功開(kai)(kai)發(fa)出(chu)一(yi)(yi)系列(lie)分子和(he)(he)機(ji)制(zhi)創(chuang)(chuang)(chuang)新、工藝(yi)先進、質量穩(wen)定的(de)(de)(de)(de)雙(shuang)抗(kang)產(chan)品(pin),多個(ge)(ge)產(chan)品(pin)獲得(de)國家科技部“十二五”、“十三五”重(zhong)大新藥(yao)創(chuang)(chuang)(chuang)制(zhi)專(zhuan)(zhuan)項(xiang)支持,已(yi)(yi)有4個(ge)(ge)雙(shuang)抗(kang)一(yi)(yi)類(lei)新藥(yao)獲得(de)中(zhong)國CDE和(he)(he)美國FDA臨床(chuang)試驗(yan)許(xu)可,目(mu)前正(zheng)在進行臨床(chuang)I/II期的(de)(de)(de)(de)評估和(he)(he)臨床(chuang)開(kai)(kai)發(fa)。圍繞(rao)核心(xin)(xin)技術(shu)與產(chan)品(pin),公司已(yi)(yi)申請(qing)發(fa)明專(zhuan)(zhuan)利64項(xiang),獲得(de)授權(quan)28項(xiang)(其中(zhong)國外授權(quan)專(zhuan)(zhuan)利8項(xiang))。友(you)(you)芝友(you)(you)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)以(yi)“溯源生(sheng)(sheng)命、解密腫瘤”為(wei)使命,以(yi)創(chuang)(chuang)(chuang)新開(kai)(kai)發(fa)為(wei)核心(xin)(xin),建立了完善的(de)(de)(de)(de)國際化研發(fa)團隊,將持續擴(kuo)大創(chuang)(chuang)(chuang)新技術(shu)和(he)(he)產(chan)品(pin)開(kai)(kai)發(fa)的(de)(de)(de)(de)深度和(he)(he)速度,為(wei)保人(ren)民的(de)(de)(de)(de)健(jian)康提供未(wei)滿(man)足的(de)(de)(de)(de)臨床(chuang)新藥(yao)。